Las técnicas de purificación de ácidos nucleicos, como la precipitación con solventes orgánicos y sales, cromatografía de intercambio iónico y esferas magnéticas, son cruciales en biotecnología. Estos métodos eliminan contaminantes y permiten obtener muestras puras de ADN, ARN y plásmidos, esenciales para la investigación científica y la producción de proteínas recombinantes. La purificación de ARN requiere cuidados especiales para evitar la degradación por ARNasas.
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LOS SOLVENTES ORGÁNICOS SE UTILIZAN PARA SEPARAR LOS ÁCIDOS NUCLEICOS DE OTROS COMPONENTES DEL LISADO
LAVADO DE ADN
EL ADN SE LAVA CON ETANOL PARA ELIMINAR CONTAMINANTES SOLUBLES
RESUSPENSIÓN DEL ADN
EL ADN SE RESUSPENDE EN AGUA DESTILADA O TAMPÓN DE BAJA SALINIDAD PARA ELIMINAR EL ETANOL
EL ADN SE REHIDRATA LENTAMENTE PARA EVITAR DAÑOS EN LA MOLÉCULA
LAS PROTEÍNAS SE PRECIPITAN EN PRESENCIA DE ALTAS CONCENTRACIONES SALINAS
EL ADN SE PRECIPITA CON ETANOL DESPUÉS DE ELIMINAR LAS PROTEÍNAS
EL ADN SE LAVA CON ETANOL Y SE RESUSPENDE EN AGUA DESTILADA O TAMPÓN DE BAJA SALINIDAD
LOS GRUPOS FUNCIONALES DE LA FASE ESTACIONARIA TIENEN CARGA POSITIVA PARA UNIR LOS ÁCIDOS NUCLEICOS
SE UTILIZAN MATRICES DE SÍLICE CON GRUPOS FUNCIONALES MAE O DEAE PARA UNIR LOS ÁCIDOS NUCLEICOS
LOS ÁCIDOS NUCLEICOS SE UNEN A LOS GRUPOS FUNCIONALES DEL INTERCAMBIADOR Y SE ELUYEN CON UN TAMPÓN DE ALTA SALINIDAD Y PH
LOS ÁCIDOS NUCLEICOS SE UNEN A LAS MICROESFERAS RECUBIERTAS DE SÍLICE EN PRESENCIA DE UN AGENTE CAOTRÓPICO
LAS MICROESFERAS RECUBIERTAS CON POLÍMEROS ESPECÍFICOS SE UTILIZAN PARA PURIFICAR ÁCIDOS NUCLEICOS ESPECÍFICOS
LAS MICROESFERAS SE AÑADEN AL LISADO Y SE SEPARAN CON UN IMÁN DESPUÉS DE LAVAR CON ETANOL
SE UTILIZA ETANOL PARA LIMPIAR LAS ESFERAS Y ELIMINAR CONTAMINANTES
SEPARACIÓN DEL ARN DEL OLIGO-T
SE ELEVA LA TEMPERATURA PARA SEPARAR EL ARN DEL OLIGO-T MEDIANTE DESNATURALIZACIÓN TÉRMICA
TRANSFERENCIA DEL ARN A UN TUBO LIMPIO
UNA VEZ SEPARADO, EL ARN SE TRANSFIERE A UN TUBO LIMPIO
SE UTILIZA UNA MEMBRANA PARA RETENER LOS PRODUCTOS DE PCR Y LUEGO SE LAVAN CON ETANOL PARA ELIMINAR CONTAMINANTES
SE UTILIZA LA DIFERENCIA DE DENSIDAD PARA SEPARAR LOS PLÁSMIDOS DEL ADN CROMOSÓMICO BACTERIANO
NEUTRALIZACIÓN RÁPIDA
SE AÑADE UN PH ÁCIDO PARA REASOCIAR EL ADN PLASMÍDICO Y PRECIPITAR EL ADN CROMOSÓMICO Y LAS PROTEÍNAS
PURIFICACIÓN DEL ADN PLASMÍDICO
SE UTILIZA ARNASAS PARA ELIMINAR EL ARN Y LUEGO SE PURIFICA MEDIANTE CROMATOGRAFÍA DE ADSORCIÓN
EL ARN ES MUY SENSIBLE A LAS ARNASAS, POR LO QUE SE DEBEN TOMAR PRECAUCIONES COMO USAR GUANTES Y LIMPIAR CON INACTIVADORES DE ARNASAS
SE DEBEN UTILIZAR REACTIVOS Y MATERIALES LIBRES DE ARNASAS PARA EVITAR SU DEGRADACIÓN DURANTE EL PROCESO DE PURIFICACIÓN
00
Proceso de purificación de ácidos nucleicos
Eliminación de proteínas, sales y otros contaminantes para obtener ácidos nucleicos puros.
01
Técnica de purificación con solventes orgánicos
Uso de la solubilidad diferencial en solventes para separar ADN de otros componentes celulares.
02
Pasos de la técnica de purificación
Incluye eliminación de solubles, precipitación de ADN, lavado y resuspensión.
