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Técnicas de Hibridación In Situ (ISH)

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Las técnicas de hibridación in situ, como FISH y CISH, son métodos moleculares para detectar secuencias de ADN y ARN en células y tejidos. Permiten la observación de secuencias genéticas en su contexto natural, facilitando el diagnóstico y la investigación genética. Estas técnicas se aplican a muestras frescas, congeladas o fijadas, y son esenciales para identificar alteraciones cromosómicas y estudios retrospectivos.

Técnicas de Hibridación In Situ (ISH)

Las técnicas de hibridación in situ (ISH) constituyen un conjunto de métodos moleculares esenciales para la detección y localización de secuencias específicas de ácidos nucleicos, tanto ADN como ARN, en preparaciones de cromosomas durante la metafase, así como en células y tejidos. Estas técnicas se distinguen por su capacidad de realizar la hibridación directamente en preparaciones citológicas o cortes de tejido, lo que permite la observación de las secuencias de interés en el contexto de la estructura celular y tisular. La ISH es ventajosa porque no requiere la extracción previa de ácidos nucleicos, es relativamente rápida, sencilla y de coste moderado. Se puede aplicar a muestras frescas, congeladas o fijadas en formol e incluidas en parafina, ofreciendo la posibilidad de realizar estudios retrospectivos. Utiliza sondas marcadas con etiquetas no radiactivas, que pueden ser de ADN, ARN o ácidos nucleicos peptídicos (PNA), proporcionando así una herramienta valiosa para la investigación y el diagnóstico.
Microscopio electrónico de última generación en laboratorio moderno con portaobjetos y muestras teñidas, guante de látex manipulando una muestra.

Tipos de Muestras y Preparaciones para ISH

La expresión "in situ" refleja que la secuencia de ácidos nucleicos objetivo se localiza en su entorno fisiológico natural, ya sea en cromosomas durante la metafase o en núcleos interfásicos para el ADN, y en el citoplasma para el ARN. Para realizar la ISH, es necesario preparar las muestras biológicas en monocapa sobre un portaobjetos de cristal. Las preparaciones de cromosomas en metafase se obtienen de cultivos celulares interrumpiendo las mitosis en metafase con colchicina. Los núcleos interfásicos desnudos se preparan mediante un proceso que incluye un choque hipotónico seguido de fijación y extensión sobre el portaobjetos. Las extensiones citológicas provienen de fluidos biológicos y se extienden sobre portaobjetos para su análisis. Las secciones de tejido, por su parte, pueden ser de muestras frescas congeladas o de muestras fijadas en formol e incluidas en parafina, lo que permite una amplia gama de aplicaciones diagnósticas y de investigación.

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00

Las técnicas de ______ in situ son métodos para detectar y ubicar secuencias de ácidos nucleicos en preparaciones de ______ y otros.

hibridación

cromosomas

01

La hibridación in situ permite observar secuencias de interés sin necesidad de extraer previamente los ______ ______.

ácidos

nucleicos

02

La ISH se puede utilizar en muestras ______, ______ o fijadas en formol e incluidas en parafina.

frescas

congeladas

Preguntas y respuestas

Aquí tienes una lista de las preguntas más frecuentes sobre este tema

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