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Il clonaggio genico è una tecnica cruciale in biologia molecolare che consente la duplicazione di segmenti di DNA. Attraverso l'uso di enzimi di restrizione e vettori come i plasmidi, è possibile inserire e moltiplicare il DNA di interesse in cellule ospiti, selezionando poi quelle trasformate per l'espressione del gene e la produzione di proteine. Questo processo ha impatti significativi nella ricerca genetica e nello sviluppo di nuove terapie e vaccini.
Il DNA di interesse viene isolato dal resto del genoma
Enzimi di restrizione
Gli enzimi di restrizione riconoscono sequenze specifiche nel DNA e lo tagliano in corrispondenza di tali siti
Il DNA viene tagliato in maniera precisa da enzimi di restrizione per generare estremità coesive
Il DNA viene inserito in un vettore di clonaggio, come un plasmide, che contiene un'origine di replicazione, un sito multiplo di clonaggio e un marcatore di selezione
Il DNA contenente il gene di interesse viene isolato dal resto del genoma
Il DNA viene tagliato con enzimi di restrizione specifici per generare estremità compatibili con il vettore di clonaggio
Il DNA di interesse e il vettore di clonaggio vengono uniti attraverso il processo di ligazione mediato dalla DNA ligasi
Il DNA ricombinante viene introdotto nelle cellule ospiti mediante trasformazione
Le cellule trasformate vengono selezionate e coltivate in un mezzo selettivo grazie alla presenza di un marcatore di selezione
Il gene clonato viene espresso per produrre la proteina corrispondente
00
Il ______ genico è una tecnica chiave della biologia molecolare che consente di duplicare segmenti specifici di DNA.
clonaggio
01
Gli enzimi di ______ tagliano il DNA in punti specifici, creando 'sticky ends' che aiutano a inserirlo in un vettore.
restrizione
02
Il pBR322 è un esempio di vettore plasmidico che contiene geni per la resistenza a ______ e ______.
ampicillina
tetraciclina
