L'elettroforesi e le sue applicazioni
Mappa concettuale
L'elettroforesi è una tecnica analitica utilizzata per separare molecole come proteine e acidi nucleici in base alla loro carica e dimensione. Sfruttando un campo elettrico, le molecole ionizzate migrano verso l'elettrodo di carica opposta. La velocità di migrazione dipende dalla carica netta e dal raggio idrodinamico della molecola. Tecniche come l'elettroforesi su gel e capillare offrono alta risoluzione e precisione, essendo fondamentali in ambiti di ricerca e clinici.
Riassunto
Schema
Concetti Base dell'Elettroforesi
L'elettroforesi è una tecnica di laboratorio fondamentale per la separazione di molecole in base alla loro carica elettrica e dimensione molecolare, sfruttando l'applicazione di un campo elettrico. Molecole come proteine, acidi nucleici e altri biopolimeri, possiedono gruppi ionizzabili che permettono loro di migrare verso l'elettrodo di carica opposta: le molecole cariche negativamente (anioni) si muovono verso l'anodo (polo positivo), mentre quelle cariche positivamente (cationi) verso il catodo (polo negativo). La velocità di migrazione è proporzionale alla carica netta della molecola e inversamente proporzionale al suo raggio idrodinamico, che dipende dalla dimensione e dalla forma della molecola stessa. La storia dell'elettroforesi inizia con le osservazioni di Ferdinand Friedrich Reuss nel 1807, ma fu Arne Tiselius a sviluppare il primo sistema elettroforetico pratico nel 1937, ottenendo il Premio Nobel per la chimica nel 1948 per i suoi contributi in questo campo.Variabili che Influenzano la Migrazione Elettroforetica
La migrazione elettroforetica di una molecola è influenzata da diversi fattori, tra cui la forza del campo elettrico applicato, la composizione del tampone elettroforetico, il tipo di supporto utilizzato, la forza ionica del sistema e la temperatura. Un aumento della forza ionica può ridurre la mobilità elettroforetica delle molecole a causa dell'effetto schermante degli ioni del tampone, che riduce l'efficacia del campo elettrico sulle molecole del campione. La temperatura ha un effetto sulla viscosità del mezzo: un aumento di temperatura riduce la viscosità, facilitando la migrazione delle molecole, ma può anche portare a problemi come l'evaporazione del tampone. Per questo motivo, è essenziale mantenere un controllo accurato della temperatura durante l'elettroforesi.Mobilità Elettroforetica e Tecniche Elettroforetiche
La mobilità elettroforetica (µ) è definita come il rapporto tra la velocità di migrazione di una particella (V) e l'intensità del campo elettrico (E). Questa mobilità è influenzata dalla carica elettrica della molecola (Q) e dal coefficiente di frizione (f), che dipende dalla forma e dalle dimensioni della molecola, nonché dalla viscosità del mezzo. Esistono diverse tecniche elettroforetiche, tra cui l'elettroforesi frontale, che avviene in soluzione libera, e l'elettroforesi zonale, che si avvale di supporti solidi come carta, gel di agarosio o poliacrilammide, e acetato di cellulosa. Questi supporti possono essere scelti in base alle dimensioni dei pori per ottimizzare la separazione delle molecole in base alle loro dimensioni e forme.Elettroforesi Zonale e Supporti Solidi
L'elettroforesi zonale è una tecnica in cui le molecole si separano attraverso i pori di un supporto solido, formando bande distinte. I supporti utilizzati possono essere classificati in non setaccianti, come la carta e l'acetato di cellulosa, e setaccianti, come i gel di agarosio e di poliacrilammide. I gel di poliacrilammide sono particolarmente apprezzati per la loro elevata risoluzione e la capacità di separare molecole con differenze minime di peso molecolare. L'elettroforesi può essere condotta in una sola dimensione (monodimensionale) o in due dimensioni (bidimensionale), dove le molecole vengono separate prima in base alla loro carica e poi al loro peso molecolare.Elettroforesi in Campo Clinico e Analisi delle Proteine
L'elettroforesi su acetato di cellulosa è una tecnica diffusa in ambito clinico per l'analisi delle proteine sieriche e plasmatiche. Sebbene sia un metodo rapido e facilmente applicabile in diagnostica, non raggiunge la risoluzione offerta dai gel di poliacrilammide o agarosio. Durante l'elettroforesi, le proteine si separano in base alla loro carica e peso molecolare. Al termine della corsa elettroforetica, le bande proteiche vengono colorate e analizzate mediante densitometria per identificare e quantificare le diverse frazioni proteiche.Elettroforesi su Gel e Capillare
L'elettroforesi su gel, sia di agarosio che di poliacrilammide, è diventata lo standard per la sua alta risoluzione e precisione. I gel di agarosio sono adatti per la separazione di acidi nucleici e proteine di grande dimensione, mentre i gel di poliacrilammide sono preferiti per la loro capacità di separare molecole con piccole differenze di peso molecolare. L'elettroforesi capillare (CE) è una tecnica moderna che unisce i vantaggi dell'elettroforesi e della cromatografia liquida ad alta prestazione (HPLC), offrendo alta risoluzione, velocità e automazione per l'analisi di un'ampia varietà di sostanze.
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Principi dell'elettroforesi
Carica elettrica e dimensione molecolare
Le molecole si separano in base alla loro carica elettrica e dimensione molecolare grazie all'applicazione di un campo elettrico
Fattori che influenzano la migrazione elettroforetica
Forza ionica e temperatura
La mobilità elettroforetica è influenzata dalla forza ionica e dalla temperatura del sistema
Composizione del tampone elettroforetico e tipo di supporto
La migrazione elettroforetica è influenzata dalla composizione del tampone elettroforetico e dal tipo di supporto utilizzato
Tecniche elettroforetiche
Elettroforesi frontale e zonale
Le tecniche elettroforetiche possono essere condotte in soluzione libera (elettroforesi frontale) o utilizzando supporti solidi (elettroforesi zonale)
Supporti utilizzati per l'elettroforesi zonale
Gel di poliacrilammide e agarosio
I gel di poliacrilammide e agarosio sono i supporti più utilizzati per l'elettroforesi zonale, grazie alla loro capacità di separare molecole in base alle loro dimensioni e forme
Acetato di cellulosa e carta
Anche l'acetato di cellulosa e la carta possono essere utilizzati come supporti per l'elettroforesi zonale, ma offrono una risoluzione inferiore rispetto ai gel di poliacrilammide e agarosio
Elettroforesi monodimensionale e bidimensionale
Le molecole possono essere separate in base alla loro carica (elettroforesi monodimensionale) o al loro peso molecolare (elettroforesi bidimensionale)
Applicazioni dell'elettroforesi
Elettroforesi su acetato di cellulosa
L'elettroforesi su acetato di cellulosa è una tecnica comunemente utilizzata in ambito clinico per l'analisi delle proteine sieriche e plasmatiche
Elettroforesi su gel di agarosio e poliacrilammide
L'elettroforesi su gel di agarosio e poliacrilammide è diventata lo standard per la sua alta risoluzione e precisione nella separazione di acidi nucleici e proteine di diverse dimensioni e peso molecolare
Elettroforesi capillare
L'elettroforesi capillare è una tecnica moderna che combina i vantaggi dell'elettroforesi e della cromatografia liquida ad alta prestazione, offrendo alta risoluzione, velocità e automazione per l'analisi di una vasta gamma di sostanze
L'elettroforesi e le sue applicazioni
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00
Durante l'elettroforesi, le molecole con carica ______ si spostano verso l'______, mentre quelle con carica ______ si muovono verso il ______.
negativa
anodo
positiva
catodo
01
Il primo sistema elettroforetico pratico fu sviluppato da ______ nel ______, e gli valse il Premio Nobel per la chimica nel ______.
Arne Tiselius
1937
1948
02
Effetto della forza ionica sulla mobilità elettroforetica
Aumento forza ionica riduce mobilità molecole per effetto schermante ioni tampone.
