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L'immunofluorescenza è una tecnica che sfrutta anticorpi etichettati con fluorocromi per identificare antigeni specifici. Utilizzata in diagnostica e ricerca, permette di analizzare strutture subcellulari e proteine, grazie a fluorocromi come FITC e TRITC. La preparazione dei campioni richiede fissazione e bloccaggio per preservare l'integrità degli antigeni e ridurre la fluorescenza di fondo.
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Gli anticorpi etichettati con fluorocromi vengono utilizzati per rilevare specifici antigeni in campioni biologici
Fonte di luce ad alta intensità
Il microscopio a fluorescenza è dotato di una fonte di luce ad alta intensità, come una lampada a vapori di mercurio o a LED, per eccitare i fluorocromi
Sistema di filtri
Il microscopio a fluorescenza è dotato di un sistema di filtri che permette di selezionare le lunghezze d'onda specifiche per l'eccitazione e l'emissione dei fluorocromi
L'immunofluorescenza può essere condotta utilizzando approcci diretti o indiretti, a seconda della presenza di anticorpi primari o secondari coniugati ai fluorocromi
La fissazione dei campioni è un passaggio critico che preserva la struttura cellulare e gli antigeni accessibili per l'immunofluorescenza
I campioni fissati devono essere conservati in condizioni ottimali per evitare il decadimento del segnale fluorescente
La permeabilizzazione dei campioni consente agli anticorpi di accedere agli antigeni intracellulari durante l'immunofluorescenza
I fluorocromi possono essere classificati in base alle loro proprietà di eccitazione ed emissione, che possono essere sfruttate per rilevare più target contemporaneamente
I fluorocromi possono essere combinati in un singolo esperimento per rilevare più target contemporaneamente, a condizione che i loro spettri di emissione siano sufficientemente distinti per evitare sovrapposizioni
La fluorescenza è un fenomeno ottico che si verifica quando una molecola assorbe energia luminosa e la riemette a una lunghezza d'onda maggiore e a un'energia inferiore
00
Principio di rilevazione dell'immunofluorescenza
Anticorpi etichettati con fluorocromi si legano agli antigeni e emettono luce sotto microscopio a fluorescenza.
01
Ruolo dei fluorocromi
I fluorocromi emettono luce quando eccitati, permettendo la visualizzazione degli antigeni.
02
Applicazioni dell'immunofluorescenza
Analisi di strutture subcellulari, proteine e studio di interazioni molecolari in vivo.
