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L'elettroforesi su gel di agarosio è una metodologia fondamentale per la separazione di acidi nucleici come DNA e RNA. Attraverso l'uso di una matrice porosa di agarosio, le molecole vengono separate in base alla loro dimensione, permettendo l'analisi e la visualizzazione dei frammenti di DNA. Questa tecnica è essenziale in ambiti come la genetica e la biologia molecolare per studiare la struttura e le funzioni degli acidi nucleici.
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Le molecole di DNA e RNA migrano verso l'anodo in un campo elettrico a causa della loro carica negativa
Selettività dei pori del gel
Il gel di agarosio agisce come un filtro selettivo, con molecole più piccole che attraversano i pori più facilmente rispetto a quelle più grandi
Relazione tra concentrazione di agarosio e risoluzione della separazione
La concentrazione di agarosio nel gel determina la dimensione dei pori e quindi la risoluzione della separazione
La scelta del gel dipende dalla dimensione dei frammenti di DNA da separare, con gel più concentrati utilizzati per frammenti più piccoli
Il gel di agarosio viene colato in una cassetta e lasciato solidificare
Aggiunta di buffer di caricamento
I campioni di acidi nucleici vengono miscelati con un buffer di caricamento contenente glicerolo o saccarosio per aumentare la densità del campione
Inclusione di coloranti di tracciamento
I coloranti di tracciamento sono inclusi nel buffer di caricamento per visualizzare il percorso di migrazione e per stimare quando interrompere la corsa elettroforetica
Si utilizza un marcatore di peso molecolare per costruire una curva standard e determinare la dimensione approssimativa dei frammenti di DNA del campione
Utilizzo di coloranti intercalanti
Dopo la corsa elettroforetica, i frammenti di DNA nel gel vengono visualizzati tramite colorazione con composti intercalanti come l'etidio bromuro o il SYBR Safe
Emissione di fluorescenza
I coloranti si legano al DNA e, quando esposti alla luce ultravioletta, emettono fluorescenza, rendendo visibili i frammenti di DNA
I risultati vengono documentati attraverso la fotografia del gel illuminato, che permette di analizzare e quantificare i frammenti di DNA separati
Le simulazioni di elettroforesi su gel utilizzano coloranti per imitare la separazione di biomolecole, fornendo un'esperienza pratica degli aspetti teorici della tecnica
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Carica delle molecole di DNA e RNA durante l'elettroforesi
Negativa, a causa dei gruppi fosfato; migrano verso l'anodo.
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Funzione del gel di agarosio nell'elettroforesi
Agisce come filtro selettivo; separa molecole in base alla dimensione.
02
Influenza della concentrazione di agarosio sulla separazione
Determina la dimensione dei pori del gel; gel più concentrati per frammenti più piccoli.
